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熱門： 麝香 心肌梗塞 偏財運 失眠 消水腫 主題 天涼泡湯趣 用手機上知識+ 知識搜尋 知識+ > > 生物學> 動物學 加入追蹤 轉寄朋友 友善列印 知識問題| 請問小牛胸腺DNA的序列 發問者：匿名 發問時間：2009-09-23 20:57:31 解決時間：2009-10-08 21:03:02 解答贈點：22 ( 共有 1 人贊助 ) 回答：1 評論： 0 意見： 1 [ 檢舉 ] 網友正面評價 100% 共有 1 人評價實驗時用到小牛胸腺DNA(ctDNA) 想請問是否有人知道 小牛胸腺DNA的鹼基序列該怎麼查呢?? 謝謝了 最佳解答網友票選 回答者：紫嫣 ( 中學級 4 級 ) 擅長領域：八字 | 命理風水 回答時間：2009-10-03 11:38:58 [ 檢舉 ] 实验 小牛胸腺DNA的制备（浓盐法） 目的要求： 了解从动物组织中提取基因组DNA的方法。 实验原理: DNA在生物体内是以与蛋白质形成复合物的形式存在的，因此提取出脱氧核糖核酸蛋白复合物（DNP）后，必须将其中的蛋白质除去。小牛胸腺，鱼类精子和植物种子的胚等含有丰富的DNA，可作为提取DNA的良好材料。动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白可溶于水或浓盐溶液（如1m/L氯化钠溶液），但在0.14m/L盐溶液中的溶解度很低，而核糖核蛋白（RNP）则溶于0.14m/L盐溶液中，利用这一性质可将脱氧核糖核蛋白与核糖核蛋白以及其他杂质分开，当核蛋白与氯仿一起振荡时，蛋白质变性而与核酸分开，核酸继续保留于水相中，再用乙醇将水相中的DNA沉淀出来。为除去DNA制品混杂的RNA，可用核糖核酸酶处理。大部分多糖在用乙醇或异丙醇分级沉淀时即被除去，如需要还可以进一步通过柱层析或电泳加以纯化。 试剂和器材 一、试剂 0.1m/L氯化钠-0.05m/L，pH 7.0柠檬酸钠缓冲溶液：先配制0.05m/L，pH=7.0柠檬酸钠缓冲溶液，然后将氯化钠溶于此缓冲溶液中，使其最终浓度达到0.1m/L。 10%氯化钠溶液；氯仿-异戊醇混合液（体积比为9∶1）；95%乙醇；无水乙醇； 二、材料 小牛胸腺。 二、器材 组织捣碎机，离心机，玻璃匀浆器。 操作方法 1. 取新鲜（或冰冻）的小牛胸腺，除去血水和结缔组织，在冰浴上切成小块，称取20g，加入2倍体积的0.1m/L氯化钠-0.05m/L，pH=7.0柠檬酸钠缓冲溶液，于组织捣碎机上高速匀浆5分钟。 2. 组织糜用转速为3000r/min的离心机离心15分钟，将沉淀用50 mL上述缓冲溶液洗涤2次，洗涤时用匀浆器研磨洗涤，每次如前离心。向最后得到的细胞核沉淀中加入6倍体积的10%氯化钠溶液，充分搅匀置冰箱中过夜，以充分提取DNP，溶液为粘稠状。将所得的半透明粘稠状液体，用滴管慢慢注入冷蒸馏水中，边加边轻轻搅动（NaCl的最终浓度为0.14m/L），这时有白色丝状物——核蛋白析出，在冰箱中静置数小时，收集沉淀。将沉淀物再溶于4倍体积的10%氯化钠溶液中，迅速搅拌以加速溶解。加入1/2体积的氯仿-异戊醇混合液，剧烈振荡5分钟左右，用转速为3000r/min的离心机离心15分钟，得三层：上层为含有DNA和DNA核蛋白的水层，下层为氯仿-异戊醇的有机溶剂层，变性蛋白质介于两层之间。 6. 吸出上面的水层，再用氯仿-异戊醇如前进行脱蛋白，直至界面处不再出现变性蛋白质为止。 7. 最后吸出上清液并将其注入两倍体积的95%乙醇中，用玻璃棒搅起白色纤维状DNA沉淀，沥干，用80%乙醇洗涤，最后用少量无水乙醇洗涤。尽量沥干乙醇后，铺开在表面皿上。置于真空干燥器内干燥，即得白色纤维DNA钠盐。 注意事项 （1）由于DNA主要存在于细胞核中，为了便于提取DNA，应严格控制胸腺破碎的条件，既要将细胞膜破碎，又要尽可能避免细胞核被破坏，导致DNA释放而被断裂，。 （2）在用氯仿-异戊醇除去组织蛋白时，要剧烈振荡使蛋白变性。若振荡不够，蛋白质不能很好除去，则影响DNA制品的质量。 相關詞： 小牛跑車,大牛 小牛,達拉斯小牛,小牛老闆,小牛飛彈,小牛 ,三信小牛,黑澀會小牛,nba小牛,小牛皮鞋 [ 快速連結 ] 其它回答( 0 ) | 意見( 1 ) | 評論( 0 )
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